Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Трансдифференциация мезенхимальных стволовых клеток крысы в ​​дофаминергические нейроны для трансплантации клеток

Райан М. Уэлчко, Трэвис Д. Халс, Сабрина С. Диффенбах, Габриэль П. Шалл, Хо Вангцзин, Лесли Р. Сигал, Джаред Р. Уоттерс, Левек Т. Ксавье, Минг Лу, Жюльен Россиньоль, Майкл И. Сандстром и Гэри Л. Данбар

Цель: Трансплантация человеческих эмбриональных дофаминергических предшественников в полосатое тело пациентов с ПД дала обнадеживающие результаты, но этические проблемы и доступность тканей ограничивают этот подход. Использование мезенхимальных стволовых клеток (МСК) обеспечивает легкодоступный источник клеток, поскольку они получены из взрослой ткани. Это исследование in vitro изучало использование МСК в качестве источника клеток для индукции нейронов DA с использованием одного аденовируса.
Методы: Наша лаборатория разработала новый аденовирус, экспрессирующий несколько вирусных генов 2A, что позволяет осуществлять полицистронную экспрессию нескольких генов (Ascl1, Lmx1a и Nurr1) для факторов транскрипции, которые участвуют в дифференцировке нейронов DA, ​​и использовала ген зеленого флуоресцентного белка (gfp) для отслеживания трансфекции. МСК культивировали с аденовирусом, отслеживали морфологические изменения, а также экспрессию gfp, что подтверждалось флуоресцентной микроскопией. Присутствие вирусной ДНК в трансфицированных клетках было подтверждено с помощью ПЦР, иммуноцитохимии и ОТ-ПЦР.
Результаты: МСК, культивированные с аденовирусом, привели к морфологическим изменениям, а также к экспрессии gfp, что было подтверждено флуоресцентной микроскопией. Присутствие вирусной ДНК в трансфицированных клетках было подтверждено с помощью ПЦР. Анализы иммуноцитохимии и ОТ-ПЦР показали, что клетки, экспрессирующие gfp, имеют ядерную комаркировку транслируемых факторов транскрипции LMX1a и NURR1, а также повышенную регуляцию этих генов, наряду с повышенной регуляцией нижестоящих генных целей, таких как тирозингидроксилаза (TH) и транспортер дофамина (DAT).