Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Трансактивация экспрессии целевого гена с помощью рекомбинантного SALL4B: маркера плюрипотентных стволовых клеток

Менгру Юань, Юн Ван, Чжихуа Жэнь, Вэй Дай и Юнпин Цзян

SALL4 является важным фактором транскрипции, который поддерживает экспансию гемопоэтических стволовых клеток. Экспрессия SALL4 также дерегулирована при нескольких типах лейкемии . Недавние исследования показывают, что SALL4B, основная изоформа SALL4, сильно модифицирована посттрансляционными механизмами, и эти модификации имеют решающее значение для их стабильности, субклеточной локализации и транскрипционной активности. Учитывая важность SALL4B в поддержке самообновления и экспансии стволовых клеток, мы оптимизировали крупномасштабный процесс экспрессии и очистки для получения SALL4B с использованием системы векторов экспрессии бакуловируса. Рекомбинантный TAT-SALL4B был эффективно очищен с помощью никелевой аффинной хроматографии в нативных условиях. Иммуноблоттинг подтвердил, что рекомбинантный SALL4B был высоко экспрессирован и очищен. В качестве первого шага для проверки биологической активности очищенного TAT-SALL4B мы исследовали, способен ли TATSALL4B, непосредственно добавленный в культуральную среду, проникать в клетки через процесс трансдукции белка. Флуоресцентная микроскопия показала, что рекомбинантный TAT-SALL4B специфически локализуется в ядре в зависимости от концентрации и времени. Анализы репортерных генов показали, что очищенный белок TAT-SALL4B активировал промотор гена OCT4, указывая на то, что рекомбинантный SALL4B был транскрипционно активен in vivo. В совокупности наши результаты показывают, что TAT-SALL4B может стать многообещающим фактором для поддержки ex vivo расширения гемопоэтических стволовых клеток .