Журнал биомолекулярных исследований и терапии

Абстрактный

Одновременная очистка человеческого FVIII/vWF и инактивация вируса в хроматографической колонке

Сергей Гаврилюк, Евгения Краснобрижа, Елена Гаврилюк и Георгий Волков

Хорошо известно, что уменьшение числа степеней свободы препятствует денатурации белка. В предыдущем исследовании мы показали, что связывающий хроматографический гель белок может служить агентом, уменьшающим число степеней свободы белка. Кроме того, высокая динамическая емкость новых разработанных гелей обеспечивала удовлетворительное удерживание пептида/белка при повышенной температуре хроматографического процесса. Оба эти фактора позволили реализовать инактивацию вируса для пептида (фрагмент стрептокиназы SK1-61) и низкомолекулярного (лизоцим молока) и среднемолекулярного (фибриногенолитический фермент из яда змеи) белка непосредственно в колонке при выделении мишеней. Целью данного исследования было изучение возможности сохранения активности высокомолекулярного комплекса FVIII/vWF, связанного ионообменными и аффинными гелями при инактивации вируса непосредственно в хроматографической колонке. Другой целью было показать, что связывающий белок адсорбент может служить надежным «ситом» для механического вымывания инфицирующих вирусов. С использованием различных хроматографических, фотометрических, ОТ-ПЦР подходов было обнаружено, что высокая динамическая емкость, определяющая высокую температурозависимую емкость адсорбента, позволяет проводить вирусинактивацию комплекса FVIII/vWF путем обработки растворителем/детергентом непосредственно в хроматографической колонке при температуре 40-50°С в течение длительного времени 3-5 часов. Биологическая активность FVIII полностью сохраняется; оболочечные и безоболочечные вирусы эффективно удаляются. Уровень элиминации модельных вирусов достаточен для полной инактивации вирусов, что позволяет рекомендовать данный метод для использования в фармацевтической промышленности.