Макото Ёсимицу, Кодзи Хигучи, Наомичи Арима, Джеффри А. Медин и Тошихиро Такенака
Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPS) в настоящее время признаны ценным инструментом для восстановления клеток посредством аутологичной трансплантации. Эти клетки можно получить из соматических клеток посредством индукции транскрипционных факторов Oct-3/4, Klf4 и Sox2. В этом исследовании мы успешно создали iPS-клетки из фибробластов кончика хвоста мыши с нокаутом α-галактозидазы А, хорошо известной мышиной модели болезни Фабри. Эти клетки Fabry-iPS демонстрировали фенотип эмбриональных стволовых клеток (ES), характеризующийся экспрессией SSEA-1, повышенной активностью щелочной фосфатазы, подавлением ретровирусного трансгена и образованием эмбриональных телец (EB). Подкожная инокуляция клеток Fabry-iPS голым мышам привела к образованию тератомы. На 6-й день EB в дифференцировочной среде показали экспрессию генов, специфичных для гемопоэтической линии. Кроме того, мы наблюдали спонтанное сокращение ЭТ, культивируемых на стромальных клетках OP9 в течение 5-7 дней. ОТ-ПЦР показала, что различные гены сердечных маркеров, такие как Nkx2.5, Gata4, Tnnt2 (сердечный тропонин T) и Mlc2a, были более высоко экспрессированы в дифференцированных культурах клеток Fabry iPS, чем в контрольных фидерных клетках. Чтобы оценить их потенциальное использование для генной терапии, была проведена лентивирусная трансдукция клеток Fabry-iPS с кДНК α-галактозидазы-A, терапевтическим геном для болезни Фабри. Эта трансдукция привела к повышению внутриклеточной и секретируемой активности α-галактозидазы A. Профиль экспрессии генов, специфичный для ES-клеток, оставался неизменным при переносе лентивирусного терапевтического гена в течение более 30 дней после трансдукции. Эти результаты показывают, что клетки Fabry-iPS легкодоступны и пригодны для использования в генной терапии.