Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

Структурный анализ циклофилина из Moniliophthora Perniciosa и ингибирующая активность циклоспорина на прорастание и рост грибов

Пауло С. Монцани, Умберто М. Перейра, Карина П. Грамачо, Фатима С. Альвим, Флавио В. Мейреллес, Главиус Олива и Жулио К. М. Каскардо

Moniliophthora perniciosa является возбудителем болезни ведьминых метел какао. Циклофилины вовлечены в широкий спектр клеточных процессов, включая реакцию на экологические стрессы, контроль клеточного цикла, регуляцию кальциевой сигнализации и транскрипционный контроль. Участие циклофилинов в патогенности было описано как у патогенных грибов по отношению к животным, так и к растениям. У дрожжей кальциневрин и циклофилин участвуют в морфогенезе и вирулентности грибов. Имеются данные о том, что циклофилин взаимодействует с кальциневрином в отсутствие циклоспорина А (CsA), и было высказано предположение, что активность CsA действует в регуляторном взаимодействии между циклофилином и кальциневрином; также в этой активности наблюдались фунгистатические или фунгицидные действия. Ген циклофилина M. perniciosa из кДНК плодового тела в векторе pET28a был клонирован, а белок был экспрессирован, очищен и кристаллизован. Структуры циклофилина в апо и связанной с CsA формах были разрешены при 1,85 и 1,47 Ǻ соответственно. Сравнение структур из разных организмов указывает на консервативные структуры циклофилинов. Небольшие различия были обнаружены в апо и связанных формах; отсюда следует, что структуры циклофилина не имеют выраженных модификаций в присутствии лиганда. Однако различные водородные связи между боковыми цепями аминокислот и молекулами воды разрываются в лигандном сайте, когда CsA связан. Анализы прорастания спор с использованием CsA показали низкую ингибирующую активность при прорастании, но высокое ингибирование роста ростковой трубки. Эти результаты показывают, что циклофилин играет важную роль в процессе роста, но не в прорастании, следовательно, предполагая, что циклофилин является потенциальной мишенью для фунгистатического действия против M. perniciosa.