Здоровье полости рта и лечение зубов

Абстрактный

Стандартизация выделения и размножения клеток соединительной ткани слизистой оболочки полости рта

Фернандес Л.А., Насименту Б.Л., Лукато-Будзяк МК, Фигейреду СМ, Карнейру Э.

Цель: Целью данного исследования было создание протокола для изоляции и расширения популяции фибромезенхимальных клеток из соединительной ткани слизистой оболочки полости рта для будущих биоинженерных протоколов. Методы: Для изоляции фибробластов и клеток-предшественников мы использовали фрагменты хирургических образцов от пациентов с показаниями к хирургическому вмешательству в полости рта. Протокол изоляции был следующим: ткань промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) с добавлением антибиотика-антимикотика (PSA). Ткань помещали в пробирку, содержащую коллагеназу типа II, и инкубировали в течение ночи в печи. После инкубации коллагеназу собирали, и ткань снова промывали один раз PBS +PSA. Затем проводили тест на колониеобразующие единицы (КОЕ). Клетки (1,0 × 105) высевали на чашку размером 10 см², содержащую модифицированную по Дульбекко среду Игла (DMEM) с высоким содержанием глюкозы, дополненную 10% сыворотки плода быка (FBS). Клетки фиксировали 10% формалином и окрашивали кристаллическим фиолетовым перед подсчетом колоний. Анализ проводили в трех повторностях. Результаты: клетки из всех образцов показали однородную морфологию с характерным звездчатым видом. Единственное различие заключалось в количестве образованных колоний. Было отмечено значительное увеличение количества колоний, образованных в первый день по сравнению с теми, которые образовались в нулевой день, и значительное уменьшение по сравнению с теми, которые образовались во второй день. Заключение: удалось разработать протокол для первичной культуры фибробластов, полученных из слизистой оболочки полости рта человека.