Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Медленный путь разворачивания гипертермофильной Tk-РНКазы H2, исследованный методом импульсного протеолиза с использованием мутантных белков

Канако Сима, Ай Нагао, Джун Окада, Сатоши Сано и Кадзуфуми Такано

Разворачивание рибонуклеазы H2 из гипертермофильной археи Thermococcus kodakarensis (Tk-RNase H2) происходит исключительно медленно. В предыдущей работе промежуточные продукты разворачивания Tk-RNase H2, IA-, IB-, IC- и ID-состояния, наблюдались с помощью анализа импульсного протеолиза при 25°C, где IB- и IC-состояния являются основными формами в медленном процессе разворачивания этого белка. Здесь мы исследовали медленный путь разворачивания Tk-RNase H2 с помощью импульсного протеолиза с использованием мутантов. Для стабилизированного варианта D7N время жизни IA- и IB-состояний уменьшилось, но IC-состояние появилось раньше при 25°C, что указывает на стабилизацию IC-состояния. Состояния IA и IB не наблюдались в дестабилизированном варианте L33A при 25°C, тогда как в диком типе эти два состояния исчезали при 50°C. Наши результаты показывают, что при более высоких температурах состояние IC является реальным нативным состоянием Tk-РНКазы H2, тогда как нативные состояния IA и IB при 25°C являются искусственными формами при более низких температурах.