Сайед Н. Алви, Ахмед Юсуф и Мухаммад М. Хаммами
Разработан и проверен простой и надежный метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для одновременного определения витамина D-2 (VD-2), витамина D-3 (VD-3), 25-гидроксивитамина D-2 [25 (OH) VD-2] и 25-гидроксивитамина D-3 [25(OH) VD-3] в плазме человека. Образцы плазмы депротеинизировали смесью метанола и 2-пропонола и экстрагировали гексаном. После испарения остаток растворяли в метаноле:воде (9,6:0,4, об./об.), центрифугировали, а затем прозрачный раствор вводили в колонку Zorbax C18. Подвижная фаза (режим градиентного элюирования) состоит из метанола, ацетонитрила и воды (pH = 3,0); элюенты контролировались фотодиодным матричным детектором (длина волны установлена на 265 нм). Зависимость между концентрацией VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 в плазме и отношением их площади пика к IS была линейной в диапазоне 5 - 100 нг/мл. Коэффициенты вариации для междневного и внутридневного анализа были все ≤ 9,7% и смещения ≤ 13,1%. Средние извлечения VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 и 25(OH) VD-3 из плазмы были все более 80%. Метод был применен для определения уровней витамина D в плазме, полученной от здоровых людей. Кроме того, он был использован для оценки стабильности VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 и 25(OH) VD-3 в плазме в различных условиях, встречающихся в клинической лаборатории.