Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

Значительное улучшение эффективности общепринятой процедуры аффинной хроматографии, применяемой для очистки моноклонального антитела за 100 циклов очистки

Уильямс Ферро, Родольфо Вальдес, Эутимио Фернандес, Ярисель Гевара, Йенисли Медина, Татьяна Альварес, Андрес Тамайо, Татьяна Гонсалес, Майра Вуд, Майлин Ла О, Йодельвис Кальво и Дебора Геада

Аффинная хроматография на протеине А-сефарозе является очень успешным методом очистки иммуноглобулинов для фармацевтического использования. Однако эффективность хроматографии и продолжительность жизни этого метода всегда должны быть скорректированы с учетом конкретных условий хроматографии (биологический источник, буферы, скорости потока, свойства антител, температура, концентрация белка, протокол очистки и т. д.). Целью данного исследования было продемонстрировать улучшение производительности установленной процедуры аффинной хроматографии, применяемой для очистки моноклонального антитела (мАТ) CB.Hep-1, используемого для очистки активного фармацевтического ингредиента вакцины против гепатита B. В заключение следует отметить, что относительно плохое восстановление mAb, наблюдаемое в условиях буферной системы 150 мМ PBS; pH 8,0/100 мМ лимонной кислоты; pH 3,0, было связано с неэффективностью элюирующего буфера для полного нарушения взаимодействия между матрицей и mAb. В этой связи удержанию mAb CB.Hep-1 в матрице способствовал лиганд, связанный с матрицей, а не неспецифические взаимодействия. Буферная система 1,5M глицин-NaOH/3M NaCl; pH 9,0/200 мМ глицин-HCl; pH 2,5 значительно улучшила восстановление аффинной хроматографии, не влияя на чистоту mAb, молекулярную однородность, утечку лиганда и содержание мышиной ДНК в 100 циклах очистки. Таким образом, применение 1,5M глицин-NaOH/3M NaCl; pH 9,0/200 мМ глицин-HCl; pH 2,5 в качестве буферной системы позволило снизить затраты на mAb CB.Hep-1 и вакцину против гепатита B соответственно.