Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Надежное, эффективное и чистое получение индуцированных мезенхимальных стволовых клеток из плюрипотентных стволовых клеток, индуцированных мРНК, в суспензии

Раджниш Верма, Порнпун Сэнгмуанг, Танабоди Паюха, Джули Д. Мендоса, Ротсарин Наранг, Напхапацорн Бонди, Сергей Дмитриев, Пол Майкл Колльер

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) участвуют во многих перспективных клинических испытаниях, направленных на лечение чрезвычайно сложных заболеваний. Безопасность в этих клинических испытаниях определяется многими факторами, такими как чистота популяции клеток МСК, полученных из тканей, используемых в терапии. Кроме того, эффективность введенных МСК должна быть проверена in vitro перед применением с помощью способности к пролиферации и воспроизводимости в ходе непрерывных пассажей. Кроме того, важно выбрать правильный источник получения МСК для успешной клеточной терапии и трансплантации. Это исследование демонстрирует надежное получение iMSC из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) здорового донора-человека (с полным генетическим тестированием, проведенным ранее) с использованием неинтегративного (мРНК) метода. Этот метод конверсии включает в себя (i) дифференциацию популяции iPSC в суспензии без iMatrix, (ii) пассирование клеток, дифференцированных на этапе (i), в присутствии кондиционированной среды MSC в течение определенного времени и в условиях, достаточных для получения iMSC в культуре в течение длительного времени без признаков эпигенетической памяти.

Анализ экспрессии плюрипотентных маркеров (Oct-4, SSEA-4, Sox-2, Tra-1-60) был подтвержден проточной цитометрией и иммуноцитохимией посредством визуальной оценки флуоресцентного микроскопа. Тератома не была развита при инъекции популяции iMSC in vivo самцам хомяков, что подтверждает трансформированную чистоту iMSC и иммуномодулирующее свойство в культуре без iPSC соответственно. Для исследований клеточного цикла и старения чистые iMSC in vitro были протестированы с помощью проточной цитометрии с использованием анализа экспрессии CD73, 90 и 105 и сравнены с UC-MSC. Позднее iMSC продемонстрировали три-дифференциацию хондроцитов, остеоцитов и адипоцитов относительно UC-MSC, что может позволить устранить недостатки использования взрослых MSC и, таким образом, предоставить ценный инструмент для будущего использования в различных клинических условиях.