Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Ремоделирование липидных рафтов во время капацитации in vitro и акросомной реакции сперматозоидов барана

Кармен Колас, Розаура Перес-Пе, Адриана Касао, Марио Оллеро, Люсия Кальеха, Маргарита Гальего, Тереза ​​Муиньо-Бланко и Хосе А. Себриан-Перес

Предыстория: Липидные плоти часто считаются устойчивыми к детергентам микродоменами (DRM). Мы впервые сообщаем о наличии двух маркеров липидных плотов, кавеолина-1 и ганглиозида GM1, на поверхности барановых сперматозоидов, а также о влиянии капацитации in vitro и акросомной динамики распределения этих маркеров, содержания белка и липидного состава DRM и не-DRM фракций.

Методы: Кавеолин-1 и ганглиозид GM1 были подтверждены иммуноцитохимическими и флуоресцентными анализами соответственно. Фракции DRM и не-DRM были разделены градиентом плотности OptiPrepTM. Холестерин назывался флуорометрией, GM1 — пероксидазной реакцией, содержание белка — спектрофотометрией, профиль жирных кислот — газовой хроматографией.

Результаты: Кавеолин-1 был обнаружен в акросоме 59,2 ± 4,3% свежих сперматозоидов, доля окрашенных клеток увеличивалась (P < 0,05) после капацитации. GM1 обнаружил, что находился в постакросоме и хвосте всех сперматозоидов, и после капацитации не было обнаружено никаких изменений. Холестерин и GM1 были распределены по всему миру постепенно с пиком во фракциях DRM. Более высокая доля (P < 0,001) насыщенных жирных кислот была обнаружена во фракциях DRM, что подтверждено индексом ненасыщенности и более значительными соотношениями липидов/белков. Капацитация in vitro вызывала снижение содержания насыщенных жирных кислот как во фракциях DRM (P < 0,001), так и во фракциях, не являющихся DRM (P < 0,01). Полиненасыщенные жирные кислоты увеличиваются в ДРМ после возникновения акросомы. Все виды лечения приводили к снижению содержания холестерина и белков в DRM (P < 0,01) и не-DRM фракциях (P < 0,001), а также к сохранению содержания GM1 в DRM (P < 0,05). Выводы: Микродомены, подобные липидным плотам, были изолированы в области градиента. Высокое содержание в них насыщенных жирных кислот обеспечивает высокопорядочную окружающую среду. Их состав меняется во время капацитации in vitro и акросомной состояния.
Общее значение: эти результаты представляют собой первую характеристику DRM спермы барана и могут способствовать лучшему пониманию механизма приобретения оплодотворяющей способности спермы.