Журнал биоэквивалентности и биодоступности

Абстрактный

Быстрый равновесный диализ (RED): высокопроизводительный метод скрининга in vitro для связывания белков плазмы с использованием плазмы человека и крысы

Джитендра Кумар Сингх, Анант Соланки, Рима С. Манияр, Дебарупа Банерджи и Викас С. Ширсат

Определение степени связывания молекулы с белками плазмы является критической фазой разработки лекарств, поскольку количество связанного с плазмой препарата влияет на дозировку соединения, эффективность, скорость выведения и потенциал взаимодействия лекарств. Таким образом, определение свободной (%Fu) и связанной (%Bound) фракций тестируемого препарата в плазме является критическим параметром, который обычно определяется в процессе открытия и разработки лекарств. Это определение возможно с помощью равновесного диализа, общепринятого и стандартного метода надежной оценки несвязанной фракции препарата в плазме. Хотя это предпочтительный метод, равновесный диализ исторически был трудоемким, отнимающим много времени, непомерно дорогим и сложным для автоматизации. Анализ связывания препарата с белком методом быстрого равновесного диализа (RED) с использованием ЖХ-МС/МС был разработан с использованием новой методики, которая привела к значительному повышению точности анализа и обеспечивает преимущество в скорости. Панель соединений, охватывающих диапазон ожидаемого связывания с белком, была протестирована в плазме человека и крыс. Разработан чувствительный и селективный метод с использованием квадрупольного тандемного масс-спектрофотометра, сопряженного с электрораспылительной ионизацией, для количественной оценки несвязанного препарата в предварительно обработанной плазме. В качестве подвижных фаз использовались 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле: 0,1% муравьиной кислоты в воде с градиентным методом ВЭЖХ. Несвязанная фракция препаратов определялась с помощью масс-спектрометра, работающего в режиме ESI. Кроме того, данные для набора из десяти соединений сравнивались с литературными значениями. С помощью описанного метода можно проводить скрининг относительно большого количества соединений на PPB в среде разработки лекарств.