Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Быстрое обнаружение белков с помощью одномерного электрофореза в полиакриламидном геле с использованием недорогого флуоресцентного оптического отбеливателя

Сашидхар РБ, Тануджа Косури и Суджата Наяк

Коммерческий флуоресцентный оптический отбеливатель тканей Ranipal ^® (F-OB) успешно применялся для окрашивания белков на нативном и SDS -1D-PAGE. F-OB очищали с использованием двухфазной системы растворителей дихлорметана и воды. Значение R _f (0,63) очищенного и неочищенного F-OB было сопоставимо на ТСХ. Масс-спектрометрия очищенного F-OB показала базовый пик при 414 (m/z). Было обнаружено, что максимумы поглощения и испускания F-OB составляют 350 нм и 430 нм соответственно. F-OB мог окрашивать белки как до, так и после электрофореза на нативном геле. Постэлектрофоретическое окрашивание было быстрым и требовало 20 минут для визуализации окрашенных белков. С другой стороны, в гелях SDS требовалось дополнительно 20 минут для экстракции SDS перед окрашиванием белков F-OB. Было обнаружено, что SDS препятствует связыванию F-OB с белками. Были загружены различные концентрации маркеров молекулярной массы, и их интенсивность флуоресценции была нанесена на график в зависимости от концентрации белков. Значения r ² варьировались от 0,965 до 0,997, что указывает на превосходную линейность. Обнаружение карбоангидразы находилось в диапазоне 8,0-800 нг. В отличие от большинства красителей, используемых для окрашивания белков, окрашивание F-OB можно было проводить в буферном растворе (2 мг/100 мл) и также было обратимым. F-OB, возможно, был бы самым экономически эффективным флуоресцентным красителем для окрашивания белков (0,04 долл. США/25,0 г). Было обнаружено, что F-OB является простым, безопасным, чувствительным, менее трудоемким и экономичным флуоресцентным красителем в качестве альтернативы для окрашивания белков в полиакриламидных гелях.