Лейноэ Ева, Нильсен Каспар Р., Баек Джон, Стеффенсен Руди, Дибкаер Карен, Богстед Мартин и Джонсен Ханс Э.
Предыстория и цели: Оценка качества аутологичной трансплантации периферических стволовых клеток крови (PBSCT) может быть улучшена путем подсчета мегакариоцитарных предшественников CD34+/CD61+ в трансплантате. Подсчет подмножеств с помощью проточной цитометрии (ПЦ) было трудно стандартизировать из-за низкой специфичности, которая может возникнуть из-за адгезии тромбоцитов или микросфер. Нашей целью было проанализировать адгезию тромбоцитов к гемопоэтическим стволовым клеткам и установить количественный анализ полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-qPCR) для транскриптов генов CD34 и CD61. Анализ использовался для изучения CD34 и CD61 как предикторов позднего восстановления тромбоцитов после PBSCT при неходжкинской лимфоме (НХЛ). Материалы и методы: Анализ ПЦ проводился на продуктах афереза, собранных для аутологичной трансплантации , а конфокальная микроскопия применялась к отсортированным клеткам. Клиническая оценка включала анализ продуктов лейкафереза 21 последовательного пациента с НХЛ, получавших высокодозную терапию и PBSCT. Раннее восстановление определялось как наблюдаемое количество тромбоцитов >20x10(9)/л до 12-го дня после трансплантации, а позднее восстановление — как наблюдаемое количество тромбоцитов <20x10(9)/л после 12-го дня после трансплантации. Для анализа ОТ-ПЦР клетки CD34+ были отсортированы из размороженных продуктов лейкафереза, а РНК была извлечена и обратно транскрибирована в кДНК для дальнейшего анализа уровней мРНК CD34 и CD61 с использованием зондов TaqMan. Результаты: было показано, что клетки CD34+/CD61+, идентифицированные с помощью FC, образуют специфическую подгруппу без признаков адгезивных зрелых тромбоцитов. Клетки CD34+/CD61+ экспрессировали транскрипты мРНК CD61, которые не были обнаружены в комплементарных клетках CD34+/CD61-. Не было выявлено положительной корреляции между подсчетом на основе FC и оценкой анализа RT-qPCR субпопуляций мегакариоцитарных предшественников . Оценка клинического воздействия путем сравнения образцов от 21 пациента с ранним и поздним восстановлением тромбоцитов не выявила прогностического воздействия для CD61/BACT (β-актин), CD34/BACT или CD61/CD34 мРНК, коэффициентов экспрессии среди отсортированных клеток CD34+. Заключение и перспективы: Определенное подмножество клеток CD34+/CD61+ может быть идентифицировано с помощью анализа FC и RTqPCR; однако подсчет этого подмножества не коррелировал с восстановлением тромбоцитов после PBSCT. Будущие исследования прогностической ценности необходимо оценить в группе пациентов с неудачей приживления в рамках международного сотрудничества в рамках Европейской группы по трансплантации крови и костного мозга (EBMT).