Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Очистка, аминокислотное секвенирование и термостабильность внеклеточной низкомолекулярной эстеразы, продуцируемой Bacillus Subtilis NRRL 41270 при ферментации

Пападжанни М. и Папамихаэль Э.М.

Было обнаружено, что внеклеточная эстеразная активность в ферментационных бульонах Bacillus subtilis NRRL 41270 находится в небольшом белке с молекулярной массой менее 10 кДа. После очистки эстеразная активность на дибутирате флуоресцеина оценивалась в 12 ед./мин/мг белков. Насыщение фермента наблюдалось при концентрации субстрата 5 мкМ. Полученная эстераза гидролизовала трибутирин. Ее удельная активность оценивалась в 17,8 мкмоль высвобожденной кислоты/мин/мг белков. Небольшой белок подвергали эксклюзионной хроматографии, SDS-PAGE и секвенированию аминокислот. Анализ выявил последовательность следующих аминокислотных остатков: eevaetysfyhitphdystshispapvqffspap, согласно которой молекула имеет 34 аминокислотных остатка и расчетную молекулярную массу 3853, что соответствовало результатам гель-фильтрации и SDS-PAGE. Анализ на основе последовательности и использование инструментов биоинформатики не выявили существенного сходства с известными белками, в то время как была выявлена ​​сильно гидрофобная молекула с α-спиральной конформацией на N-конце, остальная часть молекулы была богата β-слоями. Фермент оказался термостабильным, более 85% исходной активности сохранилось после 120 ч инкубации при 60°C. Организм-продуцент и особенности микрофермента предполагают случай биотехнологически интересного биокатализатора, который следует дополнительно исследовать с точки зрения его стабильности и производственных характеристик.