Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

Профилирование активности моноацилглицероллипазы мозга крысы с использованием жидкостной хроматографии с улучшенным аммиачным аддуктом, селективного мониторинга ионов, масс-спектрометрического анализа с положительной электрораспылительной ионизацией

Гэри В. Колдуэлл и Вэньшэн Лан

2-Арахидоноилглицеролы (2-AG) являются одними из основных эндоканнабиноидов в центральной нервной системе. Повышение регуляции центральной эндоканнабиноидной сигнализации путем селективного ингибирования активности моноацилглицероллипазы мозга (MAGL) является потенциальным терапевтическим подходом при модуляции боли, ожирения и диабета, и это лишь некоторые из них. Таким образом, чувствительный и надежный аналитический метод определения уровней эндоканнабиноидов в мозге имеет важное значение для открытия ингибиторов MAGL. Точное измерение уровней моноацилглицеринов (МАГ) с использованием жидкостной хроматографии с положительной электрораспылительной ионизацией масс-спектрометрии (ЖХ / +ESI / МС) и тандемной МС является сложной задачей, поскольку эндоканнабиноиды мозга не только подвержены стрессу в фазе исследования при жизни, но и подвержены посмертному метаболизму, миграции ацила (т. е. превращению из 2-МАГ в 1(3)-МАГ), образованию ионов металлического аддукта и химическому гидролизу, в результате чего образуются те же продукты, что и у целевого фермента. Чтобы избежать этих артефактов, мы разработали простой метод ЖХ / +ESI / МС для прямого обнаружения катионов аммонийного аддукта основных МАГ в режиме мониторинга выбранных ионов (SIM). Для анализа ингибирования МАГ in vitro изократическое элюирование ЖХ использовалось для базового разделения МАГ и их изомеров миграции ацила, полученных во время инкубации при 37oC с гомогенатом мозга крысы. Чтобы минимизировать посмертный метаболизм и изомеризацию MAG для исследований in vivo, мозг крысы гомогенизировали непосредственно в четырех миллилитрах этанола на каждый грамм мозговой ткани, и применяли линейное градиентное элюирование ЖХ для широкого профилирования эндоканнабиноидов. Показано, что метод SIM ЖХ / +ESI / MS полезен для оценки in vitro ингибирующей активности MAGL и ингибиторов гидролазы амида жирных кислот (FAAH) в мозге, а также для оценки in vivo мозга для исследований вовлечения цели.