Журнал бактериологии и паразитологии

Абстрактный

Получение и характеристика фермента стафилокиназы из Staphylococcusaureus ASIA4

Нура Хасан Аль-Захрани, Фарид Шауки Эль-Шенави*

Шесть клинических штаммов Staphylococcus aureus, выделенных из различных клинических образцов. Изоляты ASIA1 и ASIA2, выделенные из образцов мочи пациентов с инфекцией мочевыводящих путей; ASIA3, выделенный из образцов мазков пациентов с ожоговым абсцессом в университетской больнице Асьют, а также ASIA4, ASIA5 и ASIA6, полученные из образцов крови различных онкологических пациентов в Южно-Египетском онкологическом институте. Все изоляты показали различную способность образовывать гало-зоны гидролиза с различными диаметрами на кровяном агаре, агаре с подогретой плазмой, казеиновом агаре и пластинах агара с обезжиренным молоком, а также различный процент лизиса сгустка. Staphylococcus aureus ASIA3, ASIA4 и ASIA6 продуцировали 4,83, 5,98 и 2,08 ЕД/мл стафилокиназы на триптон-соевом бульоне, сниженном до 1,95, 2,08 и 1,70 ЕД/мл на бульоне с экстрактом дрожжей и гидролизатом казеина соответственно. С другой стороны, Staphylococcus aureus ASIA1, ASIA2 и ASIA5 дали 2,20, 2,93 и 3,65 U/мл на CYEB по сравнению с 2,10, 1,88 и 3,41 U/мл на TSB в качестве производственной среды. Стафилокиназа, полученная от гиперактивного продуцента Staphylococcus aureus ASIA4, была увеличена в 7,64 раза (с 2,08 U/мл до 15,88 U/мл) на оптимизированной ферментационной среде, состоящей из 5,0 г сахарозы в качестве источника углерода, 10,0 г соевых бобов в качестве источника азота, 5,0 г NaCl, 5,0 г K2HPO4 и pH 7,0, которая была инокулирована изолятом ASIA4 и инкубирована в течение 24 ч при 35°C. Более того, активность стафилокиназы достигала своего пика при оптимальных условиях ферментативной реакции, которые были следующими: время реакции 25 мин, казеин в качестве субстрата, pH реакции 8,0, температура реакции 40 °C. Кроме того, она сохраняла 100% своей активности при температуре от 15 до 45 °C и pH в диапазоне от 6,0 до 9,0. ЭДТА ингибировала активность фермента на 3,0% - 32,2% при увеличении ее значений от 30,0 до 90,0 мМ. MgCl2 в концентрации 30 мМ увеличивал активность фермента на 4%, а затем немного снижал при более высоких концентрациях, но NaCl был мощным активатором стафилокиназы при концентрациях ниже 90 мМ.