Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Сверхэкспрессия гена хитиназы из термофильного гриба Thermomyces lanuginosus в Saccharomyces cerevisiae и характеристика рекомбинантной хитиназы

М. Прасад и П. Паланивелу

Ген хитиназы из термофильного гриба Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 был клонирован и сверхэкспрессирован в Saccharomyces cerevisiae SEY 2101. Рекомбинантная хитиназа была получена в виде растворимого секретируемого белка. Было обнаружено, что активность фермента была максимальной на четвертый день при 30°C в индукционной среде. Сверхэкспрессированная хитиназа показала оптимальную активность при pH 6,5 и при 60°C. Рекомбинантная хитиназа проявила замечательную термостабильность, удерживая более 60% активности фермента через 6 часов при 50°C. Молекулярная масса сверхэкспрессированной хитиназы составила 42 кДа, как измерено с помощью SDS-PAGE. Кинетические параметры, такие как KM и Vmax фермента, были обнаружены равными 0,403 мМ и 8,74 ммоль/мин/мг белка соответственно. Синтез рекомбинантной хитиназы был сильно подавлен глюкозой. Эукариотический трансляционный ингибитор циклогексимид в индукционной среде показал 10% более высокой активности, тогда как 30% активности было ингибировано транскрипционными ингибиторами, а именно 8-азагуанином и 8-гидроксихинолином. Сверхэкспрессированная рекомбинантная хитиназа может найти потенциальное применение в фармацевтической промышленности для получения хитоолигосахаридов.