Генная технология

Абстрактный

Молекулярное обнаружение и экспрессия азурина: противоракового белка из местных изолятов видов Pseudomonas

Аслам Ф., Фарук А., Кайсер Х., Баджва С., Салим Ф. и Наз С.

Азурин был признан противораковым препаратом в 2000 году, он играет важную роль в индукции апоптоза и цитотоксичности. Азурин может встраиваться в цитозоль и ядерный материал после проникновения в опухолевые клетки и стабилизировать p53 (белок-супрессор опухолей), что способствует повышению его уровня внутри клетки. ПЦР-амплифицированный фрагмент азурина из Pseudomonas aeruginosa длиной 447 п.н. был клонирован в векторе клонирования pTG19-T. Последовательность ДНК предсказывает пре-белок с сигнальным пептидом из 19 аминокислот, за которым следует зрелый белок азурина из 128 аминокислот. Ген азурина был клонирован в векторе pET22b. Рекомбинантный вектор rpET22b (+)-Azu был клонирован в клетках BL21-Codon Plus (DE3). Оптимизированная, высокая экспрессия гена азурина была получена при концентрации IPTG 0,5 мМ через 6 часов при 37°C. Секвенирование показывает 99,8% гомологии последовательности с сообщенной последовательностью азурина. Одна молчаливая мутация, т.е. CCA в CCG, обнаружена на 17-й аминокислоте. Однако полученная аминокислота (пролин) остается прежней.