Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Интеграция лентивирусного вектора miRNA и эффективность нацеливания генов в сердечных предшественниках

Мариана Лоперфидо, Стефания Криппа и Маурилио Сампаолези

Стволовые и прогениторные сердечные клетки являются сложными для возможного применения клеточной терапии. Несколько исследовательских лабораторий используют возможность подхода аутологичной клеточной терапии, чтобы избавиться от иммуносупрессивной терапии, ответственной за нежелательные побочные эффекты. Недавно мы показали, что сердечные прогениторные клетки, выделенные от мышей с нулевым Sgcb, животной модели конечностно-поясной мышечной дистрофии типа 2E, подвергаются аберрантной дифференцировке in vitro и in vivo из-за нарушения регуляции miR669. Это семейство miRNA способно ингибировать скелетную миогенную программу, напрямую нацеленную на MyoD 3' UTR. Используя лентивирусную технологию, мы предоставили доказательства того, что можно спасти дистрофический аберрантный фенотип с помощью сверхэкспрессии miRNA669 без генной коррекции. Однако то, как вирусы, несущие miRNA, были расположены в геноме при трансдукции и как их место локализации может влиять на потенциал спасения, не было проанализировано. Здесь мы исследуем профиль интеграции лентивирусного вектора, несущего pre-miR669, в инфицированных поликлональных и клональных популяциях, полученных из сердечных предшественников Sgcb. Наше исследование показывает, что сайты ретровирусной вставки (RIS) в значительной степени ограничены кодирующими генами (65%). Хотя с учетом ограничений нашего анализа мы не обнаружили совпадений для генов, связанных с раком, и несколько секвенированных RIS выявили гены, в основном участвующие в мышечной функции. Таким образом, наши данные показывают, что профиль вставки лентивирусного вектора является клеточно-специфичным, однако состояние хроматина целевых клеток положительно влияет на вирусную интеграцию.