Журнал передовой химической инженерии

Абстрактный

Микрофлюидный реактор для последовательной работы полимеразной цепной реакции/реакции обнаружения лигазы

Масахико Хасимото, Кадзухико Цукагоши и Стивен А. Сопер

Мы разработали микрофлюидный биореактор для обнаружения мутаций отдельных оснований в геномной ДНК, где первичная полимеразная цепная реакция (ПЦР) и реакция обнаружения аллельспецифического лигирования (LDR) проводились последовательно. Влияние переноса из первичной ПЦР на последующую LDR было тщательно исследовано с точки зрения выхода и точности LDR, и мы обнаружили, что пост-ПЦР-обработка ампликонов перед их включением в фазу LDR не обязательно требовалась, что позволило нам использовать простой диффузионный смеситель для онлайн-смешивания пост-ПЦР-раствора с реагентами LDR. Мы также провели численный анализ, чтобы приблизительно оценить длину канала, необходимую для диффузионного смешивания. Мы успешно продемонстрировали способность системы обнаруживать одну мутантную ДНК в 1000 нормальных последовательностях при относительно высокой скорости обработки (общее время обработки = около 28,1 мин).