Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Выделение, частичная очистка и характеристика L-аспарагиназы из сыворотки ежа

Экпа Эммануэль, Нзелибе ХК и Ониике Э.

Необходимость дальнейшего изучения других источников терапии лейкемии побудила эту текущую работу. Уже известно, что L-аспарагиназа обладает большим потенциалом в лечении рака лейкоцитов, но источники этого фермента и его свойства определяют эффективность этого препарата. Как правило, для того, чтобы аспарагиназа идеально подходила для использования в противоопухолевой терапии, она должна удовлетворять ряду критериев. Выбранный организм должен продуцировать аспарагиназу в большом количестве или с большим выходом, и ее должно быть возможно выделить из простых источников млекопитающих. Процедуры, разработанные для очистки фермента, должны быть максимально быстрыми и упрощенными. Очищенный фермент должен иметь долгосрочную стабильность при хранении, максимальную активность при физиологическом pH и Km для субстрата ниже концентрации субстрата в крови. Поэтому целью этого настоящего исследования было частично очистить и охарактеризовать этот фермент из сыворотки Hedgehog, чтобы сравнить его противолейкозный потенциал с потенциалом из документированной литературы для возможного будущего медицинского применения. L-аспарагиназа была выделена и частично очищена из сыворотки Hedgehog, которая также известна как резервуар многих других полезных белков, включая противоядия, с использованием четырехступенчатого профиля фракционирования сульфатом аммония, диализа, ионообменной и гель-фильтрационной хроматографии. Фермент дал общий выход 77,58%, оптимальные pH и температура 7,8 и 39ºC соответственно, и Km 0,0125 мМ. Гель-фильтрация дала приблизительную молекулярную массу 139 000 Да, в то время как SDS PAGE показал субъединичную молекулярную массу 36 000 и 34 600 Да соответственно. Фермент также катализирует гидролиз глутамина, хотя и незначительно. Mg2+ и Zn2+ служат активаторами для L-аспарагиназы сыворотки Hedgehog, в то время как также наблюдалось ингибирование тяжелыми ионами, такими как Hg2+. Эта работа показывает, что в будущем источники этого фермента у млекопитающих могут оказаться более предпочтительными для лечения опухолей, зависимых от аспарагина.