Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Поддержание обонятельной слизистой оболочки in vitro: с помощью обогащенных обонятельных клеток

Ниту Сингх, Сародж С. Гопал, Раджешвар Н. Шривастава, Тулика Чандра, Сатья П. Агарвал, Санджай К. Сингх, Девендра К. Гупта и Анил К. Балапуре

Обонятельная слизистая оболочка человека (OM) регулирует обоняние посредством аксональной регенерации и миелинизации, опосредованной стволовыми клетками и обонятельными обволакивающими клетками (OEC), находящимися в нише. Очищенные OEC/обонятельные биопсии использовались для функционального восстановления в различных моделях повреждения спинного мозга (SCI). Однако недавние отчеты считают это спорным, где мы предлагаем первичную культуру OM, базальных клеток обонятельного эпителия и обонятельных эктомезенхимальных стволовых клеток. Наши определенные условия культивирования увеличивают продолжительность жизни OM с обогащением OEC, обеспечивая стратегию использования для восстановления повреждений SCI/улитки. Вкратце, OM после сбора был неферментативно нарезан, культивирован в течение 6 недель, а клетки охарактеризованы морфологически, иммуноцитохимически и вестерн-блоттингом. К 21 дню ~70% окрашенных GFAP и p75NTR, веретенообразных астроцитоподобных и уплощенных листовидных OEC показали аксональную ремиелинизацию. К 30 дню каспаза 3, 8, 9 (генный продукт и активность), фосфо-p53 отрицательные; GFAP и p75NTR положительные, была обнаружена плотная, перекрывающаяся масса клеток. Это сопровождалось дегенеративными изменениями к 6 неделям посредством окрашивания GFAP. Напротив, трипсинизация на 21 день привела к >95% OEC с уплощенной морфологией, GFAP и p75NTR положительным. OEC, полученные от человека, сравнивали с 2-дневными клетками обонятельной луковицы крысы SD, культивированными в течение 2 недель в среде F12 (GFAP и p75NTR положительные). Таким образом, культивированная обонятельная слизистая оболочка, демонстрирующая регенерацию аксонов с OEC в культуре, представляет собой средство для исследований восстановления повреждений улитки и спинного мозга.