Дженнифер Рутеринг, Маттиас Ильмер, Алехандро Ресио, Майкл Коулман, Джоди Викукал и Экхард Альт
Клеточная терапия представляет собой многообещающую новую парадигму для лечения заболеваний сердца, основной причины смерти в индустриальном мире. Недавнее открытие резидентных в тканях c-Kit+ сердечных прогениторных клеток (CPC) подстегнуло научные усилия по использованию этих клеток в терапевтических целях для регенеративных вмешательств, а первичная культура кардиомиоцитов является распространенной in vitro моделью для исследования основных молекулярных механизмов, лежащих в основе дегенерации и регенерации сердца. Текущие протоколы изоляции кардиомиоцитов часто приводят к низкому выходу клеток и недостаточному истощению фибробластов, которые затем перерастают кардиомиоциты в культуре. В этом протоколе мы описываем улучшенный метод изоляции кардиомиоцитов новорожденных крыс, который также позволяет повысить выход CPC. Щадящие методы ферментативной и механической обработки тканей обеспечивают высокое количество клеток и жизнеспособность, в то время как последующее центрифугирование в градиенте плотности Перколла минимизирует фибробласты. Мы сравнили преимущества различных ферментов и обнаружили, что коллагеназа 2 сама по себе приводит к очень высокому выходу кардиомиоцитов, тогда как применение смеси ферментов Matrase™ увеличивает относительный выход c-Kit+ CPC до 35%. Кардиомиоциты и CPC, изолированные с помощью этого протокола, могут представлять собой важный источник клеток для исследования заболеваний сердца, а также терапевтических подходов на основе клеток.