Журнал бактериологии и паразитологии

Абстрактный

Определение специфичности связывания лигандов NuoX и NuoY в комплексе I Campylobacter Jejuni

Лирио И. Кальдерон-Гомез, Кристофер Дж. Дэй, Лорен Э. Хартли-Тассел, Дженнифер К. Уилсон, Джордж Л. Мендз и Виктория Королик

Компоненты протонного насоса НАДН:убихинон (Комплекс I) дыхательного пути были идентифицированы в геноме C. jejuni. Однако парадигмальные гены nuoE и nuoF, кодирующие субъединицы модуля НАДН-дегидрогеназы Комплекса I, отсутствуют. Вместо этого гены cj1575c и cj1574c, кодирующие NuoX и NuoY, присутствуют в локусах, соответствующих nuoE и nuoF соответственно. Биоинформатический анализ показал наличие гомологов nuoX и nuoY во всех секвенированных штаммах C. jejuni и в других видах Campylobacter, а также наличие ортологов в других É›-Proteobacteria. Чтобы понять участие белков NuoX и NuoY в дыхании C. jejuni и охарактеризовать их специфичность и сродство к связыванию лигандов, был разработан массив цикла трикарбоновых кислот в качестве инструмента для идентификации белков, которые могут связываться с промежуточными продуктами этого цикла, а также с другими метаболитами. Этот массив показал, что NuoX связывает FAD2+, а NuoY связывает FAD2+ и доноры электронов малат и лактат. Исследования разницы переноса насыщения с помощью ядерного магнитного резонанса подтвердили связывание лигандов NuoY и предположили, что флавиновая часть FAD2+ сильнее взаимодействует с NuoY, чем адениновая часть. Данные по сродству, полученные с помощью поверхностного плазмонного резонанса, показали, что NuoY связывается с FAD2+ с KD 337 нМ; NuoX и NuoY имели сродство к NADH с KD 403 нМ и 478 нМ соответственно и в десять раз более низкое сродство как к NAD+, так и к FAD2+. Полученные данные свидетельствуют о том, что флавин-аденин динуклеотид может быть связан преимущественно с NAD в комплексе I C. jejuni.