Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Идентификация и характеристика молекул, обладающих антимикробной активностью, из эпидидимиса кролика с использованием протеомного подхода

Редди КВР, Суканья Дева, Клара Аранья, Мандар С. Патгаонкар и Гаури Бхонде

Антимикробные пептиды (AMP) являются ключевыми компонентами врожденной иммунной системы хозяина и образуют первую линию защиты хозяина от вторжения патогенов. В настоящем исследовании были предприняты попытки идентифицировать и охарактеризовать AMP, которые синтезируются в эпидидимальных эпителиальных клетках (EPEC) кролика Oryctologus cuniculus. Индукция EPEC ex vivo лигандом TLR-9, CpG-ODN-2006, привела к повышению регуляции нескольких AMP. Эти молекулы были идентифицированы в кислотных экстрактах объединенных гомогенатов эпидидимальной ткани с использованием протеомного подхода (ультрафильтрация, катионообменная хроматография, ОФ-ВЭЖХ, дальний вестерн-блоттинг - FWB, 2D-PAGE и MALDI-TOF-MS). Объединенная фракция ОФ-ВЭЖХ (пики 1-5), названная как эпидидимальный секреторный антимикробный белок кролика (RESAMP), показала активность против нескольких патогенов. Результаты FWB, 2D-PAGE и MALDI-TOF-MS показали, что из ~19 идентифицированных белков четыре белковые последовательности (субъединицы гемоглобина-α/β, транстиретин и кальретикулин) реагировали с антигенами ВИЧ (gp120, gp17, gp41, p24). Одна из четырех последовательностей (VLSHHFGKEFTPQVQ) показала >90% гомологии с белком гемоглобина-β. 29-мерный пептид с последовательностью VLSHHFGKEFTPQVQ, обозначенный как эпидидимальный гемоглобин бета кролика (REHbβP). Синтезированный пептид показал наивысшую оценку вероятности по шкале Моуза (PBMS) и продемонстрировал хорошую бактерицидную активность (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и Candida albicans). REHbβP не проявил цитотоксичности в отношении эндоцервикальных клеток человека (End1/E6E7) и эритроцитов кролика. Результаты иммунофлуоресценции показали, что REHbβP локализуется в стереоцилиях придатка яичка и на акросоме эякулированных сперматозоидов кролика. Насколько нам известно, это первое исследование, описывающее обнаружение AMP в придатке яичка кролика. В заключение следует отметить, что настоящее исследование предполагает, что REHbβP, полученный из EPEC, может иметь терапевтический потенциал в управлении репродуктивным благополучием человека и животных.