Журнал биоэквивалентности и биодоступности

Абстрактный

Количественное определение гидроксокобаламина в плазме человека с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с электрораспылительной тандемной масс-спектрометрией в фармакокинетическом исследовании

Густаво Д. Мендес, Фабиана Д. Мендес, Маринальва Феррейра Сампайо, Антонио Серхио Сильвейра, Лу Ши Чен, Халид М. Альхарфи и Жилберто Де Нуччи

Описан быстрый, чувствительный и специфичный метод количественного определения гидроксокобаламина в плазме человека с использованием парацетамола в качестве внутреннего стандарта (IS). Аналит и IS были извлечены из плазмы путем экстракции жидкость-жидкость с использованием органического растворителя (этанол 100%; -20°C). Экстракты были проанализированы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с электрораспылительной тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС-МС). Хроматография была выполнена на аналитической колонке Prevail C8 3 мкм (2,1×100 мм id). Метод имел хроматографическое время выполнения 3,4 мин и линейную калибровочную кривую в диапазоне 5-400 нг.мл-1 (r>0,9983). Предел количественного определения составил 5 нг.мл-1. Метод также был проверен без использования внутреннего стандарта. Точность внутрипартийной валидации с IS составила 9,6%, 8,9%, 1,0% и 2,8%, тогда как без IS она составила 9,2%, 8,2%, 1,8% и 1,5% для 5, 15, 80 и 320 нг/мл соответственно. Точность внутрипартийной валидации с IS составила 108,9%, 99,9%, 98,9% и 99,0%, тогда как без IS она составила 101,1%, 99,3%, 97,5% и 92,5% для 5, 15, 80 и 320 нг/мл соответственно. Точность валидации между партиями с IS составила 9,4%, 6,9%, 4,6% и 5,5%, тогда как без IS она составила 10,9%, 6,4%, 5,0% и 6,2% для 5, 15, 80 и 320 нг/мл соответственно. Точность валидации между партиями с IS составила 101,9%, 104,1%, 103,2% и 99,7%, тогда как без IS она составила 94,4%, 101,2%, 101,6% и 96,0% для 5, 15, 80 и 320 нг/мл соответственно. Эта процедура ВЭЖХ-МС-МС использовалась для оценки фармакокинетики гидроксокобаламина после внутримышечной инъекции 5000 мкг здоровым добровольцам обоих полов (10 мужчин и 10 женщин). Добровольцы имели следующие клинические характеристики (в зависимости от пола и выраженные как среднее значение ± SD [диапазон]): мужчины: возраст: 32,40 ± 8,00 лет [23,00–46,00], рост: 1,73 ± 0,07 м [1,62–1,85], масса тела: 72,48 ± 10,22 кг [60,20–88,00]; женщины: возраст: 28,60 ± 9,54 лет [18,00–44,00], рост: 1,60 ± 0,05 м [1,54–1,70], масса тела: 58,64 ± 6,09 кг [51,70–66,70]. Следующие фармакокинетические параметры были получены из кривых концентрации гидроксокобаламина в плазме против времени: AUClast, T1/2, Tmax, Vd, Cl, Cmax и Clast. Фармакокинетические параметры были 120 (± 25) нг/мл для Cmax, 2044 (± 641) нг.ч/мл для AUClast, 8 (± 3,2) нг.мл-1 для Clast, 38 (± 15,8) ч для T1/2 и 2,5 (диапазон 1-6) ч для Tmax. Женщины-добровольцы продемонстрировали значительно (p=0,0136) более низкую AUC (1706 ± 704) нг.ч/мл) и больший (p=0,0205) клиренс (2,91 ± 1,41 л/ч) по сравнению с мужчинами 2383 ± 343 нг.ч/мл и 1,76 ± 0,23 л/ч соответственно. Эти фармакокинетические различия могут объяснить более высокую распространенность дефицита витамина B12 у женщин- пациентов . Описанный метод хорошо валидирован без использования внутреннего стандарта, и этот подход следует исследовать в других методах ВЭЖХ-МС-МС.