Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Гистоморфометрическая оценка регенерации костной ткани, вызванной биодеградируемыми каркасами в качестве носителей стволовых клеток пульпы зуба в крысиной модели дефекта свода черепа «критического размера»

Сюзанна Аннибали, Роберта Куаранта, Антонио Скарано, Андреа Пиллони, Андреа Чикконетти, Мария Паола Кристалли, Диана Беллавиа и Ливия Оттоленги

Цель: Целью данного исследования было тестирование определенных стволовых клеток , которые могли бы улучшить формирование костной ткани в сочетании с определенными каркасами.

Методы: Стволовые клетки пульпы зуба (DPSC) были посеяны гранулярной депротеинизированной бычьей костью (GDPB) или бета-трикальцийфосфатом (ß-TCP) в крысиной модели дефекта свода черепа «критического размера». DPSC были выделены из постоянных человеческих зубов, получены и охарактеризованы с использованием специфических маркеров стволовых клеток (Nanog и Oct-4) с помощью ПЦР в реальном времени и иммунофлуоресценции. Клетки дифференцировались в течение 10-15 дней в направлении остеобластического фенотипа с 100 мкМ L-аскорбиновой кислоты, добавляемой каждый день в культуральную среду, и 20 об. процентов FBS в среде α-MEM. Остеогенное обязательство оценивалось с помощью ПЦР в реальном времени путем измерения экспрессии специфических маркеров (остеонектина и runx2). Когда было получено достаточное количество клеток, DPSC были трипсинизированы, промыты в культуральной среде и посеяны на GDPB и ß-TCP каркас с плотностью 0,5-1×106 клеток/каркас. Два двусторонних круглых дефекта критического размера (диаметр 5 мм; толщина 1 мм) были созданы из теменной кости 8 бестимусных голых крыс с дефицитом Т-клеток. Один краниальный дефект для каждой крысы был заполнен только каркасом, а другой дефект - каркасом, засеянным стволовыми клетками. Через 12 недель после операции животных подвергли эвтаназии, и был проведен гистоморфометрический анализ. Различия между группами были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом защищенной наименьшей значимой разницы Фишера (PLSD). Значение p < 0,05 считалось статистически значимым.

Результаты: Группа GDPB показала более высокий процент пластинчатой ​​кости, чем GDPB/DPSC, ß-TCP сам по себе имел более низкие уровни по сравнению с ß-TCP/DPSC. Добавление стволовых клеток значительно увеличило образование тканой кости в обоих имплантатах на основе каркаса , хотя все еще выше в имплантатах на основе GDPB

Заключение: Наши результаты показывают, что GDPB и ß-TCP, используемые в качестве каркаса для индукции регенерации костей, могут выиграть от добавления DPSC к тканеинженерным конструкциям.