Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Клиренс гепарина рецепторами-утилизаторами печени

Эдвард Н. Харрис

Диапазон технологий анализа для связывания и сигнализации был разработан в лабораториях HTS для идентификации хитовых или лидирующих соединений, действующих на GPCR. Анализ связывания [35S] GTPγS по-прежнему остается полезным и простым методом для демонстрации активации рецептора и является одним из немногих функциональных бесклеточных анализов. Однако его радиоактивная природа накладывает четкие ограничения на его использование в обычной лабораторной практике и в высокопроизводительных экспериментах. В настоящем документе мы разработали новую нерадиоактивную версию анализа с использованием меченого европием аналога GTP, в котором связывание европия с GTP можно анализировать с использованием флуоресценции с временным разрешением. В продолжение наших усилий этот анализ был адаптирован для рецепторов гистамина 3. Формат анализа был специально оценен путем тестирования известных агонистов гистамина 3 (Иметит, Иммепип, Метилгистамин, Проксифан и Гистамин) и антагонистов (GSK189254, Клобенпропит и Тиоперамид) препаратов. При оптимизированных условиях анализа, активности (pEC50 и PKB) в анализе связывания хорошо согласуются с полученными ранее в анализе изотопной функциональной активности. Анализ связывания Eu-GTP оказался очень надежным (фактор Z' 0,84) с высоким процентом по сравнению с базовыми показателями. Этот анализ может быть использован в качестве компонента каскада скрининга для скрининга антагонистов рецепторов гистамина 3.