Одноклеточная биология

Абстрактный

Экспрессия генов в отдельных клетках, выделенных из клеточной линии рака простаты CWR-R1 и ткани простаты человека, на основе фенотипа боковой популяции

Калян Дж. Гангаварапу, Остин Миллер и Венди Дж. Хасс

Определение биологических сигналов на уровне отдельных клеток может идентифицировать мутации драйверов, инициирующих рак. Методы изоляции отдельных клеток, такие как микрофлюидная сортировка и магнитные системы захвата, имеют такие ограничения, как: высокая стоимость, трудоемкость и необходимость большого количества клеток. Поэтому целью нашего текущего исследования является определение экономически и трудоемкой, надежной и воспроизводимой методики, которая позволяет изолировать отдельные клетки для анализа, чтобы способствовать регулярному использованию в лабораториях, включая стандартную ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

В текущем исследовании мы использовали отдельные клетки простаты, выделенные из линии клеток рака простаты CWR-R1 и клинических образцов простаты человека, на основе анализа боковой популяции АТФ-связывающей кассеты (ABC), оттока красителя цикла фиолетового (DCV). Была определена экспрессия четырех генов: ABCG2; альдегиддегидрогеназы1A1 (ALDH1A1); андрогенового рецептора (AR); и маркера эмбриональных стволовых клеток Oct-4.

Результаты текущего исследования в клеточной линии CWR-R1 показали экспрессию генов ABCG2 и ALDH1A1 в 67% клеток односторонней популяции и в 17% или 100% клеток не-сторонней популяции соответственно. Исследования с использованием отдельных клеток, выделенных из клинических образцов, показали, что ген Oct-4 обнаружен только в 22% клеток односторонней популяции и в 78% клеток одно-сторонней популяции. В то время как экспрессия гена AR наблюдается в 100% клеток односторонней популяции и не-сторонней популяции, выделенных из того же клинического образца простаты человека.

Эти исследования показывают, что выполнение ОТ-ПЦР на отдельных клетках, выделенных с помощью FACS, может быть успешно проведено для определения экспрессии генов в отдельных клетках из клеточных линий и ферментативно переваренной ткани. Хотя эти исследования обеспечивают простое считывание экспрессии да/нет, более чувствительная количественная ОТ-ПЦР могла бы предоставить еще больше информации при необходимости.