Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Экспрессия и очистка человеческого интерферона альфа, слитого с SAK, в Escherichia coli

Шардул Салунхе, Бхаскарджьоти Прасад, Кетаки Сабнис-Прасад, Анджали Апте-Дешпанде и Шрирам Падманабхан

Описан метод улучшенной рефолдинга и очистки человеческого интерферона -? (rhIFN ?2b), полученного из E. coli, из включений в виде белка слияния стафилокиназы (SAK). Такой белок слияния не требовал добавления редких кодонов для экспрессии и оказался стабильным при температуре 37 °C. Оптимальные условия рефолдинга включали использование мягкого денатурирующего агента без необходимости использования каких-либо других агентов для предотвращения агрегации. Белок слияния SAKrhIFN ?2b был успешно очищен с использованием двух этапов очистки и был расщеплен с помощью энтерокиназы на два фрагмента, а именно SAK и IFN. Оба белка оказались биологически активными, показывая правильное сворачивание обоих партнеров слияния. Расщепленный IFN показал похожее время удерживания на RP-HPLC, что и бактериальный немеченый очищенный IFN, а также похожую молекулярную массу на Agilent 2100 Bioanalyzer, что указывает на правильную обработку IFN после расщепления энтерокиназой. Было обнаружено, что уровни экспрессии SAK-IFN в два раза выше, чем наблюдаемые с немеченым IFN в аналогичных экспериментальных условиях.