Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Оценка питательной среды для кератиноцитов человека

Фабиана Регина Ксавье Батиста, Юссара Редер и Мария Беатрис Пуцци

Человеческие кератиноциты необходимы для тканевой инженерии кожи, применяемой для восстановления и регенерации тканей, направленной на клиническое применение. Необходимость иметь высокие концентрации клеток в течение короткого времени при выполнении пролиферации клеток является жизненно важной. Рост и поддержание этих клеток обычно включают использование среды MCDB 153, которая дополняется компонентами животного происхождения, такими как факторы роста и сыворотка плода крупного рогатого скота (FBS). Целью данной работы была оценка различных составов на основе среды MCDB 153 для пролиферации кератиноцитов. Для этого было проведено несколько экспериментов, чтобы определить, какие добавки важны для культуры клеток кожи с использованием 24-факторного дизайна. Образцы кожи были получены от четырех согласившихся пациентов, перенесших дермолипэктомию, пластическую операцию . Эти фрагменты обрабатывались 0,25% трипсином-ЭДТА в течение четырех часов при температуре 37ºC. Кроме того, эпидермис был отделен от дермы, обеспечивая клетки кожи. Периодическое культивирование проводили в 6- и 96-луночных планшетах, а также в колбах площадью 25 см2. Результаты, касающиеся роста клеток и метаболизма, показали, что кератиноциты полностью вырастали в среде MCDB 153, содержащей инсулин (7,5 мкг/мл), экстракт бычьего гипофиза - BPE (80 мкг/мл), эпидермальный фактор роста - EGF (0,08 мкг/мл), гидрокортизон (0,63 мкг/мл) и глутамин (1 г/л). С другой стороны, культуральные среды, предложенные в экспериментальном дизайне, не привели к удовлетворительному росту клеток. Кроме того, хотя начальная концентрация глюкозы была низкой в ​​большинстве случаев, лактат активно продуцировался клетками, достигавшими 1 г/л.