Наследственная генетика: текущие исследования

Абстрактный

Оценка генной терапии, опосредованной AAV, с уменьшенным объемом вектора на мышах с нокаутом Cngb3, модель ахроматопсии

Лю X, Чжан Ю, Ду В, Ши В, Тао Ю, Дэн В, Ли Дж, Чжао С, Пан Дж

Цель: Это исследование было разработано для изучения того, можно ли уменьшить объем вектора, используемого для субретинальной инъекции, для трансфекции всей сетчатки мыши C57bl/6J и может ли он восстановить функцию колбочек в модели мышей с нокаутом Cngb3 (KO).
Методы: Мыши C57bl/6J и мыши Cngb3 KO получили субретинальную инъекцию 0,5 мкл или 1 мкл вектора AAV5-smCBAmCherry и вектора AAV5-IRBP/GNAT2-hCngb3 соответственно. Целые ретинальные препараты и замороженные срезы были приготовлены из глаз мышей дикого типа для оценки трансфицированной области. Темно- и светоадаптированные электроретинограммы (ЭРГ) были зарегистрированы через два месяца после инъекции вектора в глаза мышей Cngb3 KO.
Результат: В сетчатке мышей дикого типа, которым инъецировали AAV5-smCBA-mCherry, не наблюдалось разницы между объемами инъекций. mCherry-положительные ретинальные пигментные эпителиальные (RPE) и фоторецепторные клетки наблюдались по всей сетчатке. У мышей Cngb3 KO, которым вводили AAV5-IRBP/GNAT2-hCngb3, мыши с инъекцией 1 мкл показали более высокое среднее восстановление фотопического ERG, чем мыши с инъекцией 0,5 мкл. Однако скотопические ERG были ниже у мышей с инъекцией 1 мкл, что указывает на то, что более высокие объемы инъекций привели к большему количеству повреждений.
Заключение: Уменьшенный объем (0,5 мкл) вектора вызвал меньше повреждений. Однако более высокие дозы вектора (1 мкл) восстанавливают более высокую функцию ERG у мышей Cngb3 KO.