Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Создание и характеристика новых индуцированных плюрипотентных стволовых клеток свиньи, экспрессирующих hrGFP

Ю-Цзин Ляо, Цзя-Синь Ляо, Цзюнь-Ван Ляо, Го Юань, Ю-Чжан Лю, И-Шиу Чен, Ли-Рен Чен и Дженн-Ронг Ян

Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPS) были созданы у различных видов животных с 2006 года. Свинья является потенциально полезной моделью в регенеративной медицине человека, а характеристики эмбриональных стволовых клеток свиньи (pES) во многом схожи с человеческими эмбриональными стволовыми клетками (hES). В настоящем исследовании прослеживаемый гуманизированный рекомбинантный зеленый флуоресцентный белок, экспрессирующий индуцированные плюрипотентные стволовые клетки свиньи (piPS/hrGFP+), был получен из фибробластов уха свиньи (pEF) путем введения четырех человеческих факторов транскрипции (Sox2, Oct4, Klf4 и c-Myc), сконструированных в лентивирусных векторах. Клетки piPS/hrGFP+ непрерывно и стабильно экспрессировали сигнал hrGFP непрерывно и стабильно в течение более 90 пассажей в течение 20 месяцев, несмотря на повторные субкультивирования. Они также сохранили типичные определенные характеристики, включая непрерывную пролиферацию с недифференцированным статусом, экспрессию маркеров плюрипотентности плюрипотентности ES (Oct4, AP, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 и TRA-1-81) и поддержание нормального кариотипа (36+XY). Три эмбриональных зародышевых слоя также были успешно выявлены в результате дифференциации in vitro путем образования ЭБ. Различные гистологические анализы и иммуногистохимическое окрашивание тератом выявили различные ткани, полученные из трех эмбриональных зародышевых слоев, включая нервные ткани, кератинсодержащие эпидермальные ткани, скелетные мышцы , гладкие мышцы, хрящи, жировые ткани и железистые структуры. Эти результаты подтверждают, что клетки piPS/hrGFP+ могут быть получены из pEF путем прямого перепрограммирования, и эти прослеживаемые клетки piPS/hrGFP+ будут полезны для будущего применения при трансплантации клеток и регенерации тканей.