Генная технология

Абстрактный

Эндогенные факторы, вызывающие спонтанное повреждение ДНК, приводящее к случайной интеграции в клетках человека

Харуна Камекава, Ая Куросава, Масуми Умехара, Эрико Тойода и Норитака Адачи

Случайная интеграция — это явление, при котором трансфицированные молекулы ДНК интегрируются в (случайные участки) генома хозяина посредством негомологичной рекомбинации. Хотя предполагается, что восстановление двухцепочечных разрывов ДНК приводит к случайным событиям интеграции, то, как эти эндогенные повреждения ДНК генерируются в живых клетках, плохо изучено. В этом исследовании мы представляем доказательства того, что ДНК-топоизомераза IIa (Top2α) и активные формы кислорода (ROS) ответственны за повреждение геномной ДНК, которое приводит к случайной интеграции. В частности, мы использовали клеточную линию пре-B-лимфоцитов человека для изучения эффектов уровней экспрессии клеточного Top2 и концентраций кислорода во время культивирования клеток. Мы обнаружили, что обработка клеток siRNA Top2α значительно снижает частоту случайной интеграции, в то время как отсутствие Top2β оказывало незначительное или не оказывало никакого влияния. Мы также показываем, что клетки, непрерывно культивируемые в условиях культивирования с низким содержанием кислорода (3%) после электропорации, демонстрируют сниженную частоту случайной интеграции по сравнению с нормальными условиями (21%) кислорода. Эти результаты подтверждают идею о том, что белок Top2α и ROS являются эндогенными факторами, которые могут вызывать повреждение ДНК, приводящее к случайной интеграции трансфицированной ДНК в клетки человека.