Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

Динамика связывания HSP60-Cypd, изученная с помощью поверхностного плазмонного резонанса

Екатерина А Коробкова

Цели: Связывание шаперонина HSP60 с циклофилином D (CypD) представляет собой онкогенный путь, который предотвращает открытие митохондриями пор переходной проницаемости (PTP). Таким образом, HSP60 можно рассматривать как привлекательную цель для разработки химических ингибиторов. Сложность структуры HSP60 препятствует использованию стандартных методов скрининга. Настоящее исследование было направлено на анализ динамики взаимодействий CypD с различными доменами HSP60. Метод: Была использована технология поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Антитела, которые картируются с различными областями HSP60, были иммобилизованы на биосенсорном чипе CM5 с использованием химии аминосоединения. HSP60 был присоединен к различным антителам на чипе, что привело к различным ориентациям белка, и была проанализирована кинетика его связывания с HSP60. Результаты: Константы скорости диссоциации для взаимодействий HSP60-CypD варьировались от 5,5 × 10-4 с-1 до 16 × 10-4 с-1. Константы равновесия диссоциации варьировались от 15,8 нМ до 43,5 нМ. Антитело, распознающее область между остатками 50 и 100 в экваториальном домене HSP60, предотвращало его ассоциацию с CypD. Заключение: Технология SPR оказалась успешной в анализе взаимодействий между CypD и субъединицами HSP60. Сила связывания была сопоставима с силой относительно сильного связывания антитела с антигеном. Предпочтительное связывание CypD с определенным доменом внутри субъединицы HSP60 предполагает возможность разработки молекулярного антагониста.