Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Оценка повреждений двухцепочечной ДНК с помощью рамановской спектроскопии

Аунер AW и Томас JC

Разрывы двухцепочечной ДНК [DSB] и последующее восстановление могут исправить повреждение ДНК или могут ошибочно вызвать мутации, приводящие к повреждению клеток и заболеванию. DSB можно измерить с помощью спектроскопии Рамана , используя неэластичный рассеянный свет, возникающий в результате отчетливых молекулярных колебаний очищенных образцов ДНК. При времени экспозиции 20 с и 2 накоплениях анализ Рамана показал, что круговые колебания ДНК плазмиды pBS KS+ были аналогичны контролю с водой. Ограничение одного сайта EcoR1 pBS KS+ создало линейную ДНК и значительное увеличение пиков Рамана при 880, 1044, 1084 и 1458 см ^-1 . Для дальнейшего изучения обнаружения Рамана повреждения ДНК человеческие лимфоциты Jurkat выращивали в +/- 16 мкг/мл Bleocin™. ДНК из обработанных Bleocin ^™ клеток продемонстрировала повышенное поглощение Рамана при 880, 1044, 1084 и 1458 см ^-1 по сравнению с необработанными клетками. Клетки Jurkat не способны экспрессировать проапоптотический белок Bax и p53, однако воздействие Bleocin ^™ увеличило уровни TAp73 и, следовательно, гибель клеток. Благодаря низкому уровню помех в биологических материалах и высокой чувствительности, Рамановская спектроскопия является быстрым и простым методом сравнительной оценки степени относительных DSB. В отличие от кометных анализов, которые требуют анализа живых и умирающих клеток, изолированную ДНК можно легко извлечь практически из любой клетки, сохранить и провести анализ DSB позже.