Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Даблкотиноподобная киназа 1 повышает химиорезистентность клеток колоректального рака через антиапоптозный путь

Лианна Ли, Кьерра Джонс и Хао Мэй

Предыстория: Колоректальный рак (КРР) является третьим по распространенности диагностируемым видом рака и второй ведущей причиной смертей от рака в Соединенных Штатах. Раковые стволовые клетки (РСК) считаются основной причиной рецидива КРР. Специфический маркер стволовых клеток, даблкортин-подобная киназа 1 (DCLK1), играет решающую роль в онкогенезе и прогрессировании КРР. Повышение регуляции DCLK1 коррелирует с плохим прогнозом. Неясно, коррелирует ли DCLK1 с повышенной химиорезистентностью клеток КРР. Наша цель — выявить связь DCLK1 с химиорезистентностью клеток КРР и лежащими в ее основе молекулярными механизмами.

Методы: Стабильные клетки с повышенной экспрессией DCLK1 (DCLK1+) были созданы с использованием клеток HCT116 (WT). Клетки DCLK1+ и WT были обработаны 5-фторурацилом (5-Fu) в различных дозах в течение 24 или 48 часов. Анализ MTT использовался для оценки жизнеспособности клеток, и была определена IC50 5-Fu. Количественная ПЦР в реальном времени была применена для определения экспрессии генов каспазы-3 (casp-3), casp-4 и casp-10. Экспрессия расщепленного casp-3 была исследована с помощью вестерн-блоттинга и иммунофлуоресценции.

Результаты: Наши результаты показали, что IC50 5-Fu для клеток DCLK1+ была значительно выше, чем для клеток WT как при 24-часовой, так и при 48-часовой обработке (p=0,002 и 0,048 соответственно), что указывает на повышенную химиорезистентность клеток DCLK1+. Экспрессия генов casp-3, casp-4 и casp-10 была значительно подавлена ​​в клетках DCLK1+ после обработки 5-Fu по сравнению с клетками WT (p=7,616e-08, 1,575e-05 и 5,307e-08 соответственно). Количество расщепленного casp-3 и количество casp-3-положительных клеток были значительно снижены в клетках DCLK1+ после обработки 5-Fu по сравнению с клетками WT (p=0,015).

Выводы: В заключение, наши результаты продемонстрировали, что сверхэкспрессия DCLK1 повысила химиорезистентность клеток CRC к лечению 5-Fu путем подавления экспрессии генов ключевых каспаз в пути апоптоза и активации пути апоптоза. DCLK1 может быть интригующей терапевтической мишенью для эффективного лечения пациентов с CRC.