Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Dgcr8 необходим для спецификации сердечной линии в эмбриональных стволовых клетках

Чжионг Лей, Ален ван Миль, Аннебель М ван де Вругт, Питер А. Довенданс и Йост П.Г. Слейтер

Цель: было показано, что микроРНК играют важную роль в клеточном поведении и спецификации линий, включая кардиогенную дифференцировку. Однако полное понимание их роли в дифференцировке кардиомиоцитов было затруднено из-за отсутствия надлежащей клеточной модели. Здесь мы использовали эмбриональную стволовую клетку (ЭСК), в которой отсутствует важный микропроцессор Dgcr8 (или Pasha), который позволяет вводить отдельные микроРНК для изучения их роли в сердечной дифференцировке и для более точного выбора цели.
Методы: ЭСК Dgcr8 KO культивировали в среде ЭСК с добавлением LIF с питателями из эмбриональных фибробластов мыши, а кардиальная дифференцировка была вызвана с использованием протокола дифференцировки на основе эмбрионального тела. Дифференциация контролировалась путем измерения уровней мРНК и белка кардиогенных маркеров и изменений гетерохроматина с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания и полуколичественной ПЦР.
Результаты и заключение: Мы показали, что ЭСК Dgcr8 KO действительно лишены большой популяции малых РНК, включая, помимо прочего, зрелые микроРНК. Клетки KO имели более низкую скорость пролиферации и не могли дифференцироваться в сердечную линию. К нашему удивлению, в дополнение к дефекту в обработке микроРНК, эмбриональные стволовые клетки Dgcr8 KO неспособны формировать надлежащий гетерохроматин и инактивировать генотоксичные центромерные повторяющиеся элементы. Наши результаты свидетельствуют о том, что в дополнение к контролю обработки микроРНК, Dgcr8 может выполнять ранее нераспознанную роль в подавлении гетерохроматина.