Чун-Тин Юэнь, Катпагавалли Асоканатан, Александра Дуглас-Бардсли, Кевин Марки, Питер Ригсби и Дороти Син
Вакцины против коклюша играют важную роль в программах иммунизации по всему миру, а тест на сенсибилизацию гистамином (HIST) в настоящее время является официальным тестом на выпуск партии для бесклеточных комбинированных вакцин против коклюша. HIST, будучи тестом на мышах, имеет большие проблемы с вариабельностью анализа и этические вопросы. Поэтому в ответ на 3R была разработана система биохимического анализа на основе двух функциональных доменов коклюшного токсина (PTx): ферментативно-активного A-протомера и связывающего углеводы B-олигомера. Была продемонстрирована клиническая значимость этих двух биохимических тестов в отношении токсических эффектов PTx. Для оценки практичности этой системы анализа также было проведено международное совместное исследование с участием 9 стран по переносимости методов, которое показало, что эта система анализа может быть легко принята в контрольных лабораториях и на предприятиях по производству вакцин. В этом обновлении мы предоставляем дополнительные оптимизированные условия анализа для измерения как остаточной активности PTx ADP-рибозилтрансферазы, так и активности связывания углеводов в определенных вакцинах. В целом, соответствующее разбавление вакцин поможет повысить чувствительность теста. Эксперименты с добавлением показали, что анализ связывания углеводов может обнаруживать низкие уровни PTx, аналогичные HIST. Хотя положительная тенденция с увеличением всплесков также может быть продемонстрирована в анализе активности АДФ-рибозилтрансферазы для некоторых вакцин, полученные значения в ряде вакцин с добавлением не были статистически значимыми, и это связано с высокой базовой активностью вакцин без добавления. Поскольку все реагенты этой биохимической системы анализа доступны по всему миру, легко контролируются и имеют хорошую последовательность испытаний, оба анализа можно использовать для мониторинга последовательности продукта. Анализ связывания углеводов можно даже рассматривать как потенциальную альтернативу HIST для выпуска партии бесклеточных вакцин против коклюша. Протоколы для этой системы анализа in vitro поставляются в виде дополнительных документов 1 и 2.