Журнал патологии растений и микробиологии

Абстрактный

Выявление гена белка оболочки вируса скручивания листьев картофеля методом изотермической амплификации с обратной транскрипцией и петлей

Мохаммад Амин Алмаси, Хосейн Джафари, Абубакр Моради, Неда Занд, Мехди Агапур Оджагканди и Саид Агаи

Анализ петлевой изотермической амплификации амплифицирует ДНК/РНК с высокой специфичностью и чувствительностью. В этом исследовании мы описываем оптимизированный анализ обратной транскрипции - LAMP для обнаружения вируса скручивания листьев картофеля. Во-первых, был проведен анализ DAS-ELISA для обнаружения вируса в коллекции, содержащей 40 подозрительных образцов. Наконец, два образца были идентифицированы как положительные образцы. Затем положительные образцы были проверены методами ОТ-ПЦР и RT-LAMP. Кроме того, результаты показали, что анализ RT-LAMP был в 40 раз чувствительнее и в 4 раза быстрее по сравнению с ОТ-ПЦР. Анализ RT-LAMP проводился в водяной бане, свободной от любого термоциклера или сложного лабораторного оборудования. Более того, в реакции RT-LAMP положительные образцы были обнаружены с помощью мутности, которая создавалась пирофосфатом магния. Интересно, что применение CaCl2 вместо
MgSO4, который создает пирофосфат кальция в реакции, может значительно повысить как стабильность, так и концентрацию мутности. Следовательно, это может быть интересной альтернативой MgSO4. В целом, недавно разработанный анализ RT-LAMP может быть чувствительным, специфичным и недорогим методом раннего обнаружения вируса скручивания листьев картофеля, а также других вирусных фитопатогенов.