Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

CTP: siRNA фосфохолинцитидилтрансферазы альфа (CCTα) вызывает гибель клеток рака легких

Рукия Марияни и Барак О. Абоньо

CTP: Холинцитидилилтрансфераза (CCT) является ферментом, ограничивающим скорость, необходимым для синтеза фосфатидилхолина (PC) через путь CDP-холина, который имеет решающее значение для пролиферации клеток. Клетки, условно лишенные активности CCT?, погибают в результате апоптоза. Ингибирование экспрессии или активности CCT? в раковых клетках с использованием современных молекулярных методов обеспечило бы превосходный нетоксичный механизм уничтожения раковых клеток. Целью данного исследования было изучение возможности использования последовательностей siRNA CCT? в качестве противораковых агентов путем изучения их способности вызывать гибель клеток рака легких. p53-положительные, A549 и отрицательные, H1299 линии эпителиальных клеток легких были трансфицированы различными концентрациями (0-800 нМ) последовательностей siRNA CCT? (A, B и C) и скремблированной последовательностью siRNA (siRNA S) в качестве контроля в течение 24 часов. Ингибирование CCT? Экспрессия различными siRNA определялась с помощью вестерн-блоттинга. Микроскоп Olympus использовался для наблюдения за влиянием нокдауна CCT? на структуру и морфологию клеток, в то время как роль CCT? siRNA в токсичности и выживаемости клеток анализировалась с помощью анализов Cell Titer Blue (CTB) и лактозодегидрогеназы (LDH). Все последовательности CCT? siRNA значительно ингибировали экспрессию белка CCT?. Снимки, сделанные с помощью микроскопа, показали, что необработанные и обработанные siRNA S клетки были неповрежденными и имели видимые ядра, в то время как трансфицированные CCT?-siRNA клетки были сморщенными с ядрами, содержащими темные зернистые структуры, похожие на апоптотические тельца. При более высоких концентрациях CCT?-siRNA клеточные мембраны полностью деградировали, показывая признаки лизиса клеток. Анализ CTB показал, что необработанные клетки демонстрировали высокую интенсивность флуоресценции, что указывало на присутствие более жизнеспособных клеток, которая уменьшалась по мере увеличения концентрации CCT?-siRNA. Анализ LDH показал, что трансфицированные CCT?-siRNA клетки показали более высокую поглощательную способность, чем необработанные отражающие свойства мертвых клеток. Оба анализа показали, что обработанные siRNA S клетки показали результаты, схожие с необработанными клетками, что говорит о том, что гибель клеток была специфична для ингибирования CCTasiRNA. Более того, добавление PC не улучшило жизнеспособность обработанных CCT?-siRNA клеток. Эти результаты показывают, что CCT?-siRNA сбили белок CCT?, что привело к гибели клеток, что подразумевает, что последовательности могут быть полезны в качестве противораковых агентов.