Журнал болезней крови и переливания крови

Абстрактный

Криоконсервация и подсчет эндотелиальных клеток-предшественников и эндотелиальных клеток человека для клинических испытаний

Богословский Т., Ванг Д., Марич Д., Скэттергуд-Киппер Л., Шпатц М., Аух С. и Халленбек Дж.

Предыстория: Эндотелиальные прогениторные клетки (EPC) являются маркерами эндотелиального повреждения и могут служить суррогатным маркером для восстановления сосудов в интервенционных клинических испытаниях. Целями данного исследования были модификация метода изоляции мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) и подсчета EPC и зрелых эндотелиальных клеток (EC) из периферической крови, а также оценка влияния криоконсервации на жизнеспособность PBMC и на количество EPC и EC. Пациенты/методы: EPC и EC анализировались у здоровых добровольцев в свежеизолированных PBMC, собранных в CPT (пробирки для подготовки клеток), и в PBMC, криоконсервированных с помощью: 1) среды для замораживания клеточной культуры Gibco RecoveryTM, 2) пользовательской среды для замораживания. Жизнеспособность PBMC проверялась с помощью DAPI. EPC были гейтированы для CD45- CD34+CD133+/-VEGFR2+/-, а EC были гейтированы для CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/-. Результаты: Криоконсервация в течение 7 дней при -80°C снизила жизнеспособные PBMC с 94 ± 0,5% (свежие) до 84 ± 4% (пользовательская среда) и до 69 ± 8% (среда Gibco), в то время как криоконсервация при -65°C снизила жизнеспособность до 60 ± 6% (p < 0,001, пользовательская среда) и 49 ± 5% (p < 0,001, среда Gibco). В свежих образцах ранние EPC (CD45- CD34+CD133+VEGFR2+) были подсчитаны как 0,2 ± 0,06%, поздние EPC (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) как 0,6 ± 0,1% и зрелые EC (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) как 0,8 ± 0,3% живых PBMC. Криоконсервация с Gibco и пользовательской средой замораживания при -80ºC в течение 7 дней снизила количество EPC и EC, однако это снижение не было статистически значимым. Выводы: Наши данные показывают, что криоконсервация при -80°C в течение 7 дней снижает, хотя и незначительно, жизнеспособность PBMC и количество подмножеств EC и EPC. Этот метод может обеспечить оптимизированный подход к изоляции и краткосрочной криоконсервации подгрупп ЭПК и зрелых ЭК, подходящий для многоцентровых испытаний.