Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Конститутивная экспрессия GFP-UTF1 препятствует дифференцировке клеток ES и EC

Раджкумар П. Таммер, Лоес Дж. Дрент-Диефуис и Барт Дж. Л. Эгген

Эмбриональные стволовые клетки обладают способностью к самообновлению и могут дифференцироваться во все типы клеток трех эмбриональных зародышевых линий. Ген фактора транскрипции 1 недифференцированных эмбриональных клеток (UTF1) высоко экспрессируется в ES-клетках, и ранее мы сообщали, что UTF1 тесно связан с хроматином и необходим для дифференциации плюрипотентных мышиных эмбриональных стволовых клеток (ES) и эмбриональных карциномных клеток (EC). В этом исследовании мы создали линии клеток ES и EC, конститутивно экспрессирующих GFP-UTF1, для дальнейшего изучения его роли в дифференцировке. Клетки ES и EC, конститутивно экспрессирующие GFP-UTF1, были подавлены в своей пролиферации и по-прежнему зависели от LIF для самообновления. Дифференциация эмбрионального тельца (ЭТ) ES-клеток, сверхэкспрессирующих GFP-UTF1, показала как нормальную дифференцировку, так и задержанную или неполную дифференцировку подмножества клеток. GFP-UTF1 постоянно экспрессировался в недифференцированных клетках, тогда как экспрессия GFP-UTF1 не была обнаружена в дифференцированных клетках. В то время как экспрессирующие GFP-UTF1 клетки ES дифференцировались нормально в ответ на ДМСО, дифференциация клеток EC была полностью заблокирована. Когда клетки ES и EC, экспрессирующие GFP-UTF1, обрабатывались RA, индуцировались маркеры дифференциации и снижались уровни эндогенных белков UTF1 и GFP-UTF1. Однако мРНК GFP-UTF1 и UTF1 (в клетках ES) все еще обнаруживалась, что указывает на то, что деградация белка (GFP-)UTF1 предшествовала снижению регуляции мРНК (GFP-) UTF1, что позволяет предположить, что RA индуцировала деградацию UTF1. Обобщение этих данных показывает, что подобно истощению UTF1, сверхэкспрессия GFP-UTF1 мешала дифференцировке клеток ES и EC.