Журнал биомолекулярных исследований и терапии

Абстрактный

Комплексное ацилирование ангиотензина II с помощью биотиновых реагентов, связанных с N-гидроксисульфосукцинимидом

Циньфэн Лю, Андрес Лам и Ачьют Катурия

N-гидроксисульфосукцинимид-связанные биотины (сульфоNHS-биотины) представляют собой водорастворимые биотиновые метки, обычно используемые для конъюгации биотиновой части с белками путем быстрого N-ацилирования первичных аминов. Неожиданное O-ацилирование сульфоNHSбиотином на тирозине ангиотензина II (Ag-II) и ацилирование на третьем сайте, которое невозможно охарактеризовать, были идентифицированы с помощью ЖХ-МС в дополнение к ожидаемому N-ацилированию на N-конце Ag-II. N-ацилирование подвергается только неполному гидролизу в 0,1% муравьиной кислоте, а не при pH 7,2 и 8,0, в то время как два неожиданных ацилирования гидролизуются в обоих условиях, но их гидролиз в 0,1% муравьиной кислоте был намного быстрее. Обработка дитиотреитолом селективно катализировала гидролиз обоих неожиданных ацилирований, но не N-ацилирования Ag-II. Максимальный выход O-ацилирования тирозина Ag-II составил 99% при pH 7,2 и 95% при pH 8,0 по сравнению с N-ацилированием лизина при реакции с избытком сульфоNHS-биотина с этими выходами 94% при pH 7,2 и 96% при pH 8,0. Ацилирование третьего нехарактеризованного сайта Ag-II показало максимальный выход приблизительно 17% при pH 7,2, но более высокий выход (≥ 47%) при pH 8,0 в течение 30 мин. Неожиданное O-ацилирование тирозина Ag-II произошло в течение 1 мин как при pH 7,2, так и при pH 8,0, так же быстро, как и N-ацилирование, в то время как другое неожиданное ацилирование потребовало больше времени для завершения при pH 8,0.