Наследственная генетика: текущие исследования

Абстрактный

Сравнение подсчета клеток CD34+ и CD45+ тремя различными флуоресцентными методами

Цонка Годжеваргова

Аннотация
Нумерациястволовых клеток и лейкоцитов в периферической крови и образцах афереза ​​проводилась с использованием экспрессии биомаркеров белков CD34+ и CD45+ на их клеточной поверхности. Целью данного исследования был одновременный подсчет живых стволовых клеток и лейкоцитов в образцах афереза ​​с использованием двух различных флуоресцентных конъюгатов. Конъюгат между моноклональным антителом анти-CD34 и флуоресцентным красителем DR110 окрашивал стволовые клетки в зеленый цвет. Конъюгат между моноклональным антителом анти-CD45 и флуоресцентным красителем ATTO620 окрашивал лейкоциты в красный цвет. Конъюгаты антитела анти-CD34 – DR110 и антитела анти-CD45 – ATTO620 были приготовлены карбодиимидным методом и очищены гель-фильтрацией. Подсчет проводился с использованием нового автоматического флуоресцентного микроскопа EasyCounter BC. Мертвые клетки подсчитывались с помощью монометинцианинового красителя – Sofia Green. Были проведены анализы шести образцов афереза. Полученные результаты с помощью EasyCounter BC сравнивались с результатами, полученными двумя другими стандартными методами – проточной цитометрией (Guava easyCyte 8HT) и методом флуоресцентной микроскопии (Olympus BX51). Полученные количества клеток с помощью EasyCounter BC и проточного цитометра были очень похожи. Коэффициенты вариации полученных результатов с помощью EasyCounter BC (3–6%) были ниже, чем с помощью проточного цитометра (5–8%) и микроскопа Olympus (14–18%).