Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Сравнение двух конструкций L-аспарагиназы II Erwinia carotovora: клонирование, гетерологичная экспрессия, очистка и кинетическая характеристика

Присцила Лэмб Винк, Хейке Марлис Богдава, Габи Ренар, Жоселей Мария Кьес, Луис Аугусто Бассо и Диогенес Сантьяго Сантос

L-аспарагиназа II из Erwinia carotovora может представлять собой важную альтернативную терапию при лечении острого детского лимфобластного лейкоза, несмотря на ее многообещающую более низкую активность глутаминазы, чем у L-аспарагиназ II Escherichia coli и Erwinia chrysanthemi , которые в настоящее время используются для лечения этого заболевания. Здесь мы описываем клонирование, экспрессию, очистку и определение стационарных кинетических параметров для L-аспарагиназы II E. carotovora: с (AspSP) и без сигнального пептида (AspMP). AspMP очищали до гомогенности с помощью одноэтапного протокола с выходом 91%, а AspSP — с помощью двухэтапного протокола с выходом 28%. Кроме того, оба фермента продемонстрировали схожую высокую удельную активность: 208,1 и 237,6 U мг ^-1 соответственно. Значения Km и k _cat показали, что AspMP имеет более низкую активность глутаминазы, чем AspSP. Более того, AspMP производится по более простому протоколу очистки и с более высоким выходом. Этот процесс может быть пригоден для крупномасштабного производства и представлять интерес для исследователей и биофармацевтических компаний.