Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Сочетание обратной транскрипции и мультиферментного анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов для быстрого обнаружения Escherichia Coli

Акифуми Хосода, Арата Комаба, Мичиру Кишимото и Хирото Тамура

Методы культивирования используются для мониторинга патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Однако текущие методы требуют нескольких дней для получения результатов, и продукты часто выпускаются в продажу до того, как становятся доступны результаты микробиологического анализа. Мы разработали систему извлечения РНК и обнаружения микроорганизмов с использованием модельных образцов пищевых продуктов, инокулированных Escherichia coli K-12 и O157:H7 (GTC 14536) (0 КОЕ/г и 1×101–104 КОЕ/г). Перед извлечением РНК живые или мертвые клетки инокулировались в образцы пищевых продуктов, образцы гомогенизировались, и извлеченные РНК использовались для синтеза кДНК с использованием случайного 6-мера. ПЦР использовалась для анализа целевых генов, а продукты ПЦР расщеплялись двумя рестриктазами (HhaI и HaeIII) для анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ). ПЦР подтвердила извлечение РНК и синтез кДНК до 1×101 КОЕ/г образцов живых клеток. Мультиферментный RFLP (MeRFLP) показал, что размеры полученных фрагментов ДНК соответствуют теоретическим размерам фрагментов, что позволяет предположить, что обратная транскрипция-MeRFLP (RT-MeRFLP) может идентифицировать целевые бактерии. Эти результаты показывают, что RT-MeRFLP, который не требует культивирования и может быть завершен в течение 6,5 ч, является многообещающим подходом для недорогой, быстрой и надежной системы идентификации бактерий в пищевых продуктах.