Журнал исследований и терапии стволовых клеток

Абстрактный

Совместное культивирование инсулин-продуцирующих человеческих клеток EndoC- βH1 с пограничными стволовыми клетками нервного гребня частично защищает от гибели клеток, вызванной цитокинами

Анонгнад Нгамджарияват, Светлана Васильовская, Кирилл Турпаев, Филипп Равассар, Нильс Уэлш, Елена Козлова и Рикард Дж. Фред

Недавно мы наблюдали, что совместное культивирование бета-клеток мыши и крысы с мышиными пограничными стволовыми клетками нервного гребня (bNCSC) защищает от гибели бета-клеток, вызванной воспалительными цитокинами, возможно, посредством прямых межклеточных соединений, опосредованных кадгерином. Однако не было рассмотрено, можно ли защитить бета-клетки человека с помощью этой стратегии. Если это возможно, это было бы важным подходом для разработки новых протоколов для улучшения результатов трансплантации островков пациентам с диабетом 1 типа. Поэтому целью данного исследования было изучение влияния совместного культивирования bNCSC с инсулин-продуцирующими человеческими клетками EndoC-βH1 на гибель клеток, вызванную цитокинами. Для этой цели GFP-положительные bNCSC культивировали вместе с GFP-отрицательными человеческими клетками EndoC-βH1 в присутствии цитокинов IL-1γ (50 ЕД/мл) и IFN-γ (1000 ЕД/мл). Затем клетки окрашивали йодидом пропидия и трипсинизировали для анализа методом проточной цитометрии. Анализ флуоресценции йодида пропидия в GFP-положительных и GFP-отрицательных клетках показал, что клетки EndoC-βH1 погибали в меньшей степени при совместном культивировании с bNCSC, чем при культивировании без bNCSC. Мы также наблюдали, что клетки EndoC-βH1 образовывали соединения N-кадгерина, но не E-кадгерина с bNCSC. Популяция клеток bNCSC содержала большую долю клеток, экспрессирующих бета-тубулин, что указывает на нейрональную дифференциацию. Защитная функция соединений N-кадгерина была подтверждена обнаружением того, что нейтрализующее антитело N-кадгерина противодействовало эффекту совместного культивирования. Мы пришли к выводу, что взаимодействие между человеческими инсулин-продуцирующими клетками и bNCSC приводит к снижению восприимчивости инсулин-продуцирующих клеток к провоспалительным цитокинам in vitro.