Журнал микробных и биохимических технологий

Абстрактный

Экспрессия биологически активного рекомбинантного гормона роста человека в E. coli на основе промотора арабинозы: стратегии сверхэкспрессии и простые методы очистки

Судхирбабу Сурапанени, Анджали Апте-Дешпанде, Кетаки Сабнис-Прасад, Джитендра Кумар, Вина А Райкер, Пракаш Котвал и Шрирам Падманабхан

Была разработана и внедрена система экспрессии на основе промотора арабинозы в E. coli для производства и очистки рекомбинантного человеческого гормона роста (rhGH). Исследования во встряхиваемых колбах показали значительные количества rhGH, экспрессированные в модифицированном векторе pBAD24 (pBAD24M) по сравнению с исходным вектором pBAD24. В то время как уровни rhGH достигли всего 75 мг л ^-1 с pBAD24 в биореакторе, они достигли ~1860 мг л ^-1 с вектором pBAD24M в аналогичных условиях, судя по денситометрии белков, разрешенных электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Белок rhGH был успешно очищен от телец включения после денатурации мочевины с помощью двух простых этапов ионообменной хроматографии с общим выходом 40%, что составляет ~750 мг л ^-1 очищенного hGH, что является самым высоким зарегистрированным выходом очищенного rhGH на сегодняшний день. Такой очищенный бактериальный rhGH был охарактеризован с помощью N-концевой последовательности, исследований спектров CD, анализа масс-отпечатков пальцев и анализа на биоанализаторе Agilent 2100. Биологическая активность очищенного rhGH была сопоставима с коммерчески доступным hGH (соматотропином).